１９２６年１月２２日至２５日，国民党二届一中全会仍推举汪精卫任宣传部长，秘书为沈雁冰。２月５日，汪精卫提议毛泽东继续代理宣传部长，经第二次常委会讨论通过。２月１６日，国民党中常会第五次会议通报：宣传部代理部长毛泽东因病请假两星期，部长由沈雁冰代理。然而据沈雁冰回忆：“此次毛泽东的请假虽说‘因病’，实际上他是秘密往韶关(湘、粤边界)去视察那里的农民运动。”
毛泽东任代理宣传部长后，首先建立健全宣传工作体系，从调查研究入手，重新制定宣传计划。还有一个突出的特点，就是十分重视理论宣传。在任职的７个月内，他根据当时的革命形势亲自动笔写文章近三十篇。除此，他还特别重视对重大事件的宣传，利用宣传机关的有利条件捍卫国共合作事业，为宣传、贯彻孙中山的革命的三民主义，同反动倾向进行了坚决斗争。就这样，他不负众望，很快使国民党的宣传工作有了新的起色。
１９２６年５月１５日至２２日，国民党二届二中全会在广州召开。毛泽东在２０日的会议上做了《宣传部工作报告》。这次会议通过的《整理党务案》，规定担任国民党中央各部部长职务的共产党员必须辞职。于是，毛泽东便离开了国民党中央宣传部。
从上述情况来看，毛泽东在１９２５年１０月至１９２６年５月，在国民党中央宣传部既没有担任部长或副部长，也没有任秘书，而是任代理部长。
１９２６年５月１５日至２２日，在广州召开国民党第二届中央执行委员会第二次全体会议。会上，蒋介石向全会提出限制共产党，由新右派独揽国民党党权的《整理党务案》，规定共产党员不得担任国民党中央的部长。此党务案被通过后，在国民党中央担任部长的共产党员全部被迫辞职。５月２８日，国民党中常会召开有各部部长和中央监察委员参加的第二十九次会议，通过毛泽东等辞职问题案。６月２２日，国民党中央宣传委员会改组，毛泽东及其他共产党人被免去委员职务。
１９２７年，中国国民党中央农民运动讲习所成立
为培养和造就一大批坚定的农民运动骨干，中共中央农委拟定了《目前农运计划》，其中第六条规定“在武昌开办农民运动讲习所”。为落实此计划，毛泽东亲赴江西、湖北、湖南，与三省国民党党部商议此事，得到三省党部中的共产党人和国民党左派的积极支持。１１月底，毛泽东到武汉后，便着手筹办农讲所。
１９２７年１月１６日，湘、鄂、赣三省党部联合推选毛泽东、陈克文、周以栗、陈荫林、张眉宣、李汉俊、王礼锡、袭式农等人为代表组成筹备处，着手工作，并将农讲所定名为“湘鄂赣农民运动讲习所”。
在筹建湘鄂赣农民运动讲习所的过程中，毛泽东深深感到，根据全国农民运动发展形势的需要，仅仅为三省培养和造就农运骨干是远远不够的。要迎接全国农运潮的到来，就必须培养更多的农运人才。于是提议扩大招生范围。毛泽东的提议得到筹备处其他人的一致赞同。在这样的情况下，毛泽东便联合国民党著名左派人物邓演达，通过他进一步取得国民党中央党部的批准，遂决定将三省农讲所扩大为“中国国民党中央农民运动讲习所”。
